上海美迪西的生物部在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、體外生物學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)領(lǐng)域有豐富的經(jīng)驗(yàn)。從最初的cDNA文庫構(gòu)建到藥物設(shè)計(jì)，通過蛋白質(zhì)純化，結(jié)構(gòu)測(cè)定和分析測(cè)定，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)主要內(nèi)容

穩(wěn)定細(xì)胞株篩選服務(wù)內(nèi)容和流程：1)常規(guī)細(xì)胞：a. 殺傷曲線繪制；b. 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，鋪板，用不同的抗生素濃度篩選細(xì)胞單克隆；c. qPCR或Western Blot檢測(cè)穩(wěn)定克隆的外源基因表達(dá)水平。2)特殊細(xì)胞：a. 根據(jù)細(xì)胞特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)或?qū)嶒?yàn)需求，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案并與客戶探討確定實(shí)驗(yàn)方案；b. 預(yù)實(shí)驗(yàn)，通過轉(zhuǎn)染含有GFP報(bào)告基因的質(zhì)粒確定最佳轉(zhuǎn)染試劑，并優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件；c. 殺傷曲線繪制；d. 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，鋪板，用不同的抗生素濃度篩選細(xì)胞單克隆；e. qPCR或Western Blot檢測(cè)穩(wěn)定克隆的外源基因表達(dá)水平。

原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn):常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和構(gòu)建細(xì)胞模型，進(jìn)行形態(tài)學(xué)、基因水平和蛋白質(zhì)（組）水平的實(shí)驗(yàn)。服務(wù)內(nèi)容：細(xì)胞原代培養(yǎng)、細(xì)胞傳代培養(yǎng)、3D細(xì)胞培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)周期：視具體實(shí)驗(yàn)定。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)服務(wù)內(nèi)容和流程：1）質(zhì)粒：a. 進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，通過轉(zhuǎn)染含有報(bào)告基因的質(zhì)粒優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件；b. 轉(zhuǎn)染條件確定后，按照客戶方案進(jìn)行轉(zhuǎn)染；c. qPCR或Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。2）SiRNA：a. 根據(jù)基因序列，設(shè)計(jì)并合成siRNA；b. 進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，通過轉(zhuǎn)染帶有熒光標(biāo)記的陰性對(duì)照siRNA優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件；c. 通過qPCR和Western Blot驗(yàn)證siRNA的沉默效率，篩選siRNA最佳使用濃度。

細(xì)胞活力檢測(cè)(MTT法):在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞，總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力。噻唑蘭，簡(jiǎn)稱MTT，可透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，活細(xì)胞線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性MTT還原為難溶于水的藍(lán)紫色的Formazan結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中，結(jié)晶物能被二甲基亞砜（DMSO）溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映細(xì)胞數(shù)量。

細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn):細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過程，而是主動(dòng)過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用；它并不是病理?xiàng)l件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過程。

流式細(xì)胞檢測(cè):流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）是一種對(duì)液流中排成單列的細(xì)胞或其它生物微粒（如微球，細(xì)菌，小型模式生物等）逐個(gè)進(jìn)行快速定量分析和分選的技術(shù)。該技術(shù)廣泛的運(yùn)用于從基礎(chǔ)研究到臨床實(shí)踐的各個(gè)方面，涵蓋了細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、藥理學(xué)、遺傳學(xué)及臨床檢驗(yàn)等領(lǐng)域。

耐藥株誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn):采用體外低濃度梯度遞增聯(lián)合大劑量間斷沖擊方法誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥性。諸如：人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株、人乳腺癌紫杉醇耐藥株、人肺腺癌紫杉醇耐藥株、人肝癌氟尿嘧啶耐藥株、人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株、人口腔上皮癌長(zhǎng)春新堿耐藥株、人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株、人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株、人卵巢癌順鉑耐藥株、人白血病阿霉素耐藥株、人卵巢癌紫杉醇耐藥株、人胃癌順鉑耐藥株、人白血病阿霉素耐藥株、人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株、人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株、人肝癌氟尿嘧啶耐藥株、人乳腺癌抗雌激素耐藥株、人乳腺癌Tamoxifen耐藥株、小鼠激素依賴性乳腺癌細(xì)胞等。

原代/傳代細(xì)胞培養(yǎng)（Primary/continuoua cell culture）:細(xì)胞的生長(zhǎng)需要營養(yǎng)環(huán)境，用于維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。從多細(xì)胞生物中分離所需要細(xì)胞和擴(kuò)增獲得的細(xì)胞以及對(duì)細(xì)胞進(jìn)行體外改造，觀察，必須解決細(xì)胞離體培養(yǎng)問題，同微生物細(xì)胞培養(yǎng)的難易相比，比較困難的是來自多細(xì)胞生物的單細(xì)胞培養(yǎng)，特別是動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)。

細(xì)胞活力檢測(cè)（Cell viability test）:活細(xì)胞中的脫氫酶能將MTT還原成不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物（甲臜，F(xiàn)ormazan），并沉淀在細(xì)胞中，而死細(xì)胞沒有這種功能。二甲亞砜（DMSO）能溶解沉積在細(xì)胞中的藍(lán)紫色結(jié)晶物，溶液顏色深淺與所含的Formazan量成正比，最后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfection）:穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或持久的轉(zhuǎn)染是用于建立克隆的細(xì)胞系，這種細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染的目的基因整合到染色體DNA中并指導(dǎo)適量目的蛋白的合成。一般來說（由細(xì)胞類型決定），形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率比瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的效率低1到2個(gè)數(shù)量級(jí)。利用可選擇的遺傳標(biāo)記物有利于從非轉(zhuǎn)染細(xì)胞的畢竟中分離出稀少的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染物。

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（Transient transfection）:采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法能夠方便快捷地對(duì)基因功能進(jìn)行研究與分析，且基因表達(dá)水平高，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè)。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)常用的實(shí)驗(yàn)室裝備

細(xì)胞學(xué)在生命科學(xué)科中起著至關(guān)重要的作用，近年來細(xì)胞學(xué)蓬勃發(fā)展，并取得了重大的進(jìn)展，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)建也是各個(gè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)公司或者院校必備的實(shí)驗(yàn)室。以下是部分實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備：

一、CO2培養(yǎng)箱

CO2培養(yǎng)箱是細(xì)胞培養(yǎng)的必備儀器，它為細(xì)胞提供了一個(gè)體外培養(yǎng)的舒適環(huán)境，如適宜的溫度、濕度、酸堿度、O2濃度等，主要應(yīng)用于組織工程、體外受精、神經(jīng)系統(tǒng)科學(xué)、癌癥研究和其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞研究等。細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)很容易受到各種細(xì)菌、微生物的感染，因此，CO2培養(yǎng)箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要。

ESCOCelCulture系列CO2培養(yǎng)箱具有穩(wěn)定的培養(yǎng)環(huán)境、專業(yè)的滅菌功能和獨(dú)特的抑菌功能。如90℃，14Hour即可完成濕熱滅菌過程，能有效殺死各種微生物；Ulpa過濾器，腔體內(nèi)達(dá)到5級(jí)空氣質(zhì)量；不銹鋼拋光內(nèi)膽，有效抑制微生物附著；ESCO專利ISOCIDETM表面抗菌涂層技術(shù)可有效地意識(shí)微生物在箱體表面滋生，實(shí)驗(yàn)證明，24小時(shí)內(nèi)，消除箱體表面的99.9%的細(xì)菌。可靠的性能，簡(jiǎn)潔的操作，完美的設(shè)計(jì)，為各種類型細(xì)胞提供最佳的培養(yǎng)條件，講幫助您的科學(xué)夢(mèng)想變成現(xiàn)實(shí)更近一步！
二、超凈工作臺(tái)/生物安全柜
細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)無菌環(huán)境要求很高，在細(xì)胞操作時(shí)，一般需要在100級(jí)空氣質(zhì)量條件下進(jìn)行，因此超凈工作臺(tái)或生物安全柜就必須配備。

新加坡ESCO超凈工作臺(tái)和生物安全柜，為您提供更加安全的防護(hù)。

三、純水系統(tǒng)
體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)水質(zhì)特別敏感，對(duì)水的純度要求較高。培養(yǎng)用水中如果含有一些雜質(zhì)，即使含量極微，有時(shí)也會(huì)影響細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)，水中的內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡，內(nèi)毒素含量越低，對(duì)細(xì)胞毒性越小，越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代；內(nèi)毒素含量過高，會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。用金屬蒸餾器制備的蒸餾水，可能會(huì)含有某些金屬離子，一般不作為培養(yǎng)用水。配制培養(yǎng)用液應(yīng)使用經(jīng)石英玻璃蒸餾器三次蒸餾的三蒸水或超純水凈化裝置制備的超純水。
美國密理博Millipore公司成立于1945年，總部在美國麻省波士頓，在全世界三十多個(gè)國家和地區(qū)有子公司和辦事處，為一百多個(gè)國家和地區(qū)提供產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。目前公司全球雇員超過5,800人。自上世紀(jì)六十年代起，密理博就已經(jīng)開始致力于實(shí)驗(yàn)室用純水系統(tǒng)的研究和開發(fā)，為世界各地高校和臨床、制藥實(shí)驗(yàn)室提供日產(chǎn)幾升至幾千升的超純水(I級(jí))、分析級(jí)水(II級(jí))和實(shí)驗(yàn)室級(jí)水(III級(jí))純化系統(tǒng)。多年來，Milli-Q、Elix、Super-Q、RiOs、Direct-Q和Simplicity等品牌在各類科學(xué)文獻(xiàn)中隨處可見，已經(jīng)成為全球科研工作者心目中的權(quán)威品牌。
四、液氮罐
為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃，因此，需要液氮罐。在此環(huán)境中，一般細(xì)胞可以保存十年具有活性。

MVE XC系列液氮罐的容量自700 – 5000管及150至1000多個(gè)凍存管。產(chǎn)品持久耐用、重量輕，制造技術(shù)世界領(lǐng)先，并有5年的真空保證。

聯(lián)系我們

郵箱：marketing@medicilon.com.cn

電話：02158591500

以上是關(guān)于細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)等內(nèi)容，信息資料來源于美迪西官網(wǎng)。