卵巢早衰動物模型
臨床的卵巢早衰(POF)是指卵巢功能提前減退,常見為女性在40歲以前出現閉經,以閉經,不育,雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高為特征的一種疾病。在人群中發病率為1%~3%,在繼發性閉經中占2%~10%,診斷以至少半年或半年以上閉經多次發生,排除其他原因為基礎,卵巢早衰是婦科分泌領域的常見病。
POF病因多種多樣,具體發病機制尚不清楚,為了尋找病因和有效的治療方法,就必須建立與人類臨床表現和發病機制相似的動物模型。國內外專家學者根據POF的病因的多樣性建立了不同的動物模型。
1、材料與方法
1.1 實驗材料
雌性Wistar大鼠。
1.2 實驗動物分組
本實驗選用雌性Wistar大鼠40只,體重260~300 g,隨機分成2組。正常對照組:20只。實驗模型組:20只。
1.3 實驗方法
1.3.1 POF大鼠模型制備 實驗模型組雌性Wistar大鼠用雷公藤多甙片(10 mg/片),0.6 mg/(100 g?d)體重,灌胃1次/d,連續9d,建立POF動物模型。
1.3.2 組化標本制備
對實驗動物用1%戊巴比妥鈉(40ml/kg)腹腔麻醉后開胸,經左心室70滴/min滴入1%肝素鈉的生理鹽水500ml,同時剪開右心耳。繼用0.1m磷酸鹽緩沖液(PBS,PH=7.4)配制的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定。取出實驗動物的卵巢組織,放入含4%多聚甲醛PBS的固定液中進行后固定大約2h,之后將實驗動物的卵巢組織切成薄片移入含20%蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放,至組織薄片沉底,經水包埋,恒冷箱連續橫切片,片厚20μm。經OCT包埋,恒冷箱連續切片,片厚16 μm,-70℃保存備用。
1.3.3 尼氏染色
冷凍切片吹干,經PBS漂洗5min3次,將切片置入1%甲苯胺藍溶液中37℃孵育90min,取出后用蒸餾水沖洗,PBS漂洗5min3次,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,光濕微鏡下觀察。
2、結果
尼氏染色結果:
正常對照組大鼠卵巢的尼氏染色切片上,卵泡數目正常,卵泡無閉鎖,間質無明顯增生。
實驗模型組大鼠卵巢可見卵巢萎縮,卵泡數目減少,卵泡閉鎖增多,間質增生明顯。
根據尼氏染色結果證明POF動物模型制備成功。
3、討論
由于POF的病因與發病機理尚不清楚,為了尋找此病的有效的治療方法及發生發展規律,建立切實可靠的POF模型顯得由為重要。根據目前的各種造模結果來看,藥物型POF模型簡單可靠,容易操作,可作為研究POF的模型,但是由于方法還不夠成熟,需要更進一步的探討藥物的劑量與給要時間以造出最理想的模型。為臨床的治療提供有效數據,造模型的同時,更要探討對其他一些器官的影響。如肝、腎、神經系統等,這會對人類的健康具有更大的意義。

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