美迪西免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)分析服務(wù)

2016-05-11

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免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)分析服務(wù)

? 免疫印跡
? 免疫共沉淀
? ELISA
? 免疫組化
? 免疫熒光

美迪西以抗體平臺(tái)為核心建立了一系列相關(guān)的后續(xù)免疫學(xué)檢測(cè)平臺(tái)，有ELISA,,WesternBlot等。
ELISA檢測(cè)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。

Western Blot是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法，用于檢測(cè)經(jīng)電泳或斑點(diǎn)雜交后固定于膜上的蛋白質(zhì)的檢測(cè)。特異、穩(wěn)定的液態(tài)酶標(biāo)抗體和相應(yīng)的底物，保證了快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)；而避免了放射性物質(zhì)的使用，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)，對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。

免疫檢測(cè)技術(shù)

免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)

一、抗原抗體反應(yīng)
二、淋巴細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù)
三、免疫學(xué)常用的分子生物學(xué)技術(shù)

1、抗原抗體反應(yīng)

抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)：特異性、可逆性、階段性、可見(jiàn)現(xiàn)象；
抗原－抗體反應(yīng)的分類：沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、免疫標(biāo)記技術(shù)；
其中免疫標(biāo)記技術(shù)是指用熒光素、酶及放射性同位素示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗原(或抗體)進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)示蹤物質(zhì)來(lái)檢測(cè)未知抗原或抗體的一種方法。該方法可提高靈敏度。對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性或定量及定位。

2、淋巴細(xì)胞的功能測(cè)定技術(shù)

（一）淋巴細(xì)胞的分離：
①外周血單個(gè)核細(xì)胞分離
②淋巴細(xì)胞亞群的分離及鑒定（表面標(biāo)志選擇性、純化淋巴細(xì)胞亞群）

（二）淋巴細(xì)胞的功能測(cè)定技術(shù)
體外法：
淋巴細(xì)胞增殖實(shí)試驗(yàn)
細(xì)胞毒試驗(yàn)
酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（enzyme-linkedimmunospot, ELISPOT）
體內(nèi)法：
①OT試驗(yàn)(細(xì)胞免疫）
②細(xì)胞因子檢測(cè)：機(jī)體的免疫細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞)及非免疫細(xì)胞能產(chǎn)生不同種類的細(xì)胞因子，它們?cè)诿庖邞?yīng)答中起調(diào)控作用。細(xì)胞因子檢測(cè)是判斷機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)，對(duì)某些疾病的診斷、病程觀察、預(yù)后判斷等是十分必要的。

檢測(cè)方法：
a.生物學(xué)活性檢測(cè)(Bioassay)：依賴細(xì)胞株增殖法/靶細(xì)胞殺傷法/細(xì)胞病變抑制法/細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)物分析法
b.免疫學(xué)檢測(cè)法：因?yàn)榧?xì)胞因子具有抗原性，所以可以應(yīng)用抗原-抗體反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)；ELISA：應(yīng)用細(xì)胞因子的單克隆抗體和多克隆抗體；ELISPOT：Enzyme-linked immunospot assay,酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)；流式細(xì)胞儀
c.分子生物學(xué)檢測(cè)法：應(yīng)用細(xì)胞因子的探針進(jìn)行檢測(cè)
d.生物芯片檢測(cè)

3、免疫學(xué)常用的分子生物學(xué)方法

①免疫印跡：高分辯率的凝膠電流與免疫化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合雜交技術(shù)，具有凝膠電流分析的容量大高分辨率和免疫化學(xué)分析的敏感度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。免疫印跡技術(shù)用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)特性、表達(dá)及分布的最常用的方法。

②免疫PCR：抗原與抗體反應(yīng)與 PCR 技術(shù)相結(jié)合的一種新技術(shù)，原理同 ELISA，不同的是 PCR 的放大系統(tǒng)取代了酶標(biāo)記的放大效應(yīng)，此方法可測(cè)量微量抗原或抗體。

免疫檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用

免疫檢測(cè)技術(shù)以廣泛應(yīng)用于生物科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。
1.免疫疾病診斷
用免疫血清學(xué)方法對(duì)人和動(dòng)物傳染病、寄生蟲(chóng)病、腫瘤、自身免疫病和變態(tài)反應(yīng)疾病進(jìn)行診斷，是免疫技術(shù)最突出的應(yīng)用。尤其是酶標(biāo)抗體技術(shù)，已成為多種傳染病的常規(guī)診斷方法，如已有的人各型肝炎、豬瘟等 ELISA 試劑盒，它們簡(jiǎn)便、快速，又具有高度的敏感性和可重復(fù)性。

2.動(dòng)物植物生理活動(dòng)研究
動(dòng)植物中存在一些如激素、維生素等活性物質(zhì)，它們?cè)隗w內(nèi)含量極微少，但在調(diào)節(jié)機(jī)體的生理活動(dòng)中起重要作用，因此通過(guò)分析測(cè)定這些生物活性物質(zhì)的含量及變化來(lái)研究機(jī)體的各種生理功能（如生長(zhǎng)生殖等）。由于這些物質(zhì)含量極低，用常規(guī)化驗(yàn)方法難以準(zhǔn)確測(cè)出。目前放射免疫測(cè)定和酶免技術(shù)已能精確測(cè)出 ng(10 -9 g) 及 pg(10 -12 g) 水平的物質(zhì)，它們已成為測(cè)定動(dòng)物、植物、昆蟲(chóng)中微量激素及其它活性物質(zhì)，研究動(dòng)物、植物生理和生物防治的重要手段。

3.物種及微生物鑒定
各種生物之間的差異都可表現(xiàn)在抗原性不同，物種種源越遠(yuǎn)，抗原性差異越大，因此可用區(qū)分抗原性的血清學(xué)反應(yīng)進(jìn)行物種鑒定、物種的分類等工作。血清學(xué)反應(yīng)在細(xì)菌、病原菌等微生物鑒定和血清型及亞型的分析方面已得到廣泛應(yīng)用。但對(duì)動(dòng)物種源，植物和昆蟲(chóng)分類方面還是一個(gè)新的領(lǐng)域。

4.動(dòng)物、植物性狀的免疫標(biāo)記
通過(guò)分析動(dòng)物、植物的一些優(yōu)良性狀（如高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性等）的特異性抗原，然后用血清學(xué)方法進(jìn)行標(biāo)記選擇育種，這是一個(gè)很有前途的方向，它比分子遺傳學(xué)標(biāo)記選擇育種簡(jiǎn)便。

5.免疫增強(qiáng)藥物和疫苗的研究
疫苗研究中需用血清學(xué)反應(yīng)和細(xì)胞免疫技術(shù)測(cè)定免疫的效果。在研究一些免疫增強(qiáng)藥物，尤其研究腫瘤藥物時(shí)，需用細(xì)胞免疫技術(shù)分析測(cè)定它們對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的增強(qiáng)作用。因?yàn)榧?xì)胞免疫是機(jī)體抗腫瘤、抗病毒的一個(gè)重要機(jī)制。

6.發(fā)病機(jī)理研究
傳染病的病原從機(jī)體特定部位感染，并在特定組織細(xì)胞內(nèi)增殖，引起發(fā)病。一熒光抗體感染或免疫酶組化染色，可在細(xì)胞水平上確定發(fā)病等病原微生物的感染細(xì)胞，還可用于研究自身免疫病和變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)病機(jī)理，如免疫復(fù)合物的沉積部位的分析。

7.分子生物學(xué)研究

在基因工程的分離、克隆的篩選，表達(dá)產(chǎn)物的定性與定量分析，表達(dá)產(chǎn)物的純化等均涉及到免疫技術(shù)。如通常用免疫沉淀方法分離 mRNA 基因，酶標(biāo)抗體核酸探針（地高辛核酸探針）檢測(cè)篩選克隆，免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)分析表達(dá)產(chǎn)物的分子量、 ELISA 或 RIA 分析表達(dá)量、免疫親和層析純化表達(dá)產(chǎn)物，免疫方法分析表達(dá)產(chǎn)物的性質(zhì)如免疫原性。免疫技術(shù)已是分子生物學(xué)研究中必不可少的工具。