美迪西細胞毒性實驗服務

2016-03-23

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上海美迪西的生物部在體外生物學領域有豐富廣泛的經驗，通過酶水平測定、細胞水平測定、細胞生物學、生物化學、體外同位素測定、穩定細胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術等，提供一套完整的生物學服務。

細胞毒性檢測

美迪西細胞水平測定服務項目

細胞毒性分析
細胞凋亡檢測分析
細胞遷移分析
細胞侵襲分析
HTRF 細胞水平檢測分析
免疫染色分析
免疫熒光分析(96/384 孔板)
報告基因分析(綠色熒光蛋白/熒光素酶)
放射性配體受體結合試驗
細胞攝取分析
基因敲除分析
MicroRNA過表達分析
MicroRNA 敲除分析
有關腺病毒/逆轉錄病毒/慢病毒載體的應用分析
美迪西建立了100多種細胞株用于細胞水平測定。
乳腺癌細胞
大腸癌細胞
白血病細胞
肝癌細胞
腎癌細胞
肺癌細胞
黑素瘤細胞
卵巢癌細胞
胰腺細胞
胃癌細胞

了解細胞毒性服務詳情

細胞毒性是化學物質(藥物)作用于細胞基本結構和/或生理過程，如細胞膜或細胞骨架結構，細胞的新陳代謝過程，細胞組分或產物的合成、降解或釋放，離子調控及細胞分裂等過程，導致細胞存活、增殖和/或功能的紊亂，所引發的不良反應。

細胞毒性按作用機制可分3種類型:
①基本細胞毒性，涉及一種或多種上述結構或功能的改變，作用于所有類型的細胞;
②選擇細胞毒性，存在于某些分化細胞上，主要通過化學物質的生物轉化，與特殊受體結合或特殊的攝入機制所引發；
③細胞特殊功能毒性，對細胞結構和功能損傷輕微，但對整個機體損傷非常嚴重。

細胞毒性實驗方案的確立在確定MTT法作為細胞毒性實驗的方法之后，我們對實驗中可能涉及的各個參數進行了摸索和優化。最初，由于一切都是未知，因此常常幾個參數一起調整，使得各個參數對結果的影響不是很清楚，走了一些彎路。后期逐漸摸清了參數對結果影響的權重，實驗方案逐步確立。
考慮的實驗參數有:細胞批次、細胞密度、孵育時間、加藥次數、MTT 量、MTT 孵育時間、DMSO溶解時間(振蕩時間)等。

細胞毒性實驗方法穩定后的部分數據在細胞毒性實驗方案穩定之后，在各孔吸光度的標準差、變異系數和各孔抑制率的標準差都可以控制在很低的水平，表明該實驗方案是穩定的，具有良好的重現性。

細胞毒性實驗質量評價指標

對細胞毒性進行質量評價的指標初步定為以下七條：
1、OD平均值:反映復孔間OD值的平均水平，OD值越大，細胞數越多。
2、復孔OD值間的標準差(STDEV):反映各復孔OD值之間的離散情況。標準差越大，說明復孔間不平行性越大，操作誤差越大。
3、OD值間的變異系數(CV):也是反映復孔間OD值離散情況的指標。由于OD值間的標準差(STDEV)的單位和OD的單位是一致的，不能體現離散的權重，因此引入變異系數(CV)。這一指標以百分比的形式表現OD 值的離散情況，形象、直觀。

4、存活率(%Viability):計算各藥物濃度下細胞的存活率可以反映細胞存活情況，該值越大，說明藥物的細胞毒性作用越小。

5、存活率的標準差(%STDEV):該值反映如以每個復孔均作為單獨的實驗,則同批的復孔可以看作數批實驗，此時存活率的分布情況。該指標越大，說明復孔間越不平行。

6、存活率的變異系數(%CV):該指標反映各復孔間存活率的離散情況，該值越大，說明說明每一列細胞孔(即一系列稀釋單孔)間不平行性越大。

7、半數致細胞毒性濃度:指對半數細胞產生毒性作用所需濃度。該指標可用來反映實驗系統是否正常工作及評價未知藥物對細胞的毒性。