GPCR（G蛋白偶聯受體）作為細胞信號傳導的核心分子，在藥物研發和基礎研究中具有極為重要的地位。作為人體中最大的膜受體超家族，GPCR參與了絕大多數生理過程和病理機制，并廣泛分布于各個組織器官。GPCR活性檢測技術是研究GPCR信號轉導、功能機制以及藥物篩選的關鍵手段。

這些技術通過檢測GPCR激活后引發的細胞內信號變化，幫助科研人員深入了解受體的活性狀態、信號傳導路徑以及與配體的相互作用。美迪西云講堂邀請侯利蘋博士為大家解答GPCR細胞活性檢測技術遇到的問題。

如果你也有關于GPCR的問題，可以觀看侯利蘋博士云講堂視頻回放！

1、cAMP是很小的分子，并且在體內是天然存在的，怎么獲得cAMP的抗體的？   

侯利蘋博士：小分子通常被定義為半抗原，本身難以刺激機體產生免疫反應，也不容易誘導抗體生成。為了獲得針對小分子的抗體，一般是將小分子（如cAMP）與大分子載體（如BSA）結合，使其能夠被免疫系統識別，然后免疫動物并利用雜交瘤技術獲得單克隆抗體。

2、美迪西是否對外承接GPCR細胞株構建服務。一般需要多久？

侯利蘋博士：我們可以承接GPCR細胞株構建業務，在構建細胞株的過程中，首先需要進行慢病毒質粒合成，這個一般需要2到3周，完成質粒合成后，我們進入病毒包裝階段，這一過程大約需要1周。接下來構建混合克隆，我們需要進行抗生素篩選和擴增，這一階段大約需要2周，獲得混合克隆是6周。如果后續檢測需要單克隆細胞，我們將使用流式細胞儀將細胞分選至96孔板中進行培養。單克隆細胞的生長和擴增過程大約需要1個月，之后的擴增和檢測需要2周。

因此，整個時間周期為：質粒合成一般2-3周，病毒包裝1周，混合克隆篩選2周，單克隆篩選6周，即拿到混合克隆6周，拿到單克隆12周。

3、鈣流檢測實驗中，細胞密度為什么選擇5,000細胞/孔？

侯利蘋博士：5,000細胞/孔是我們常用的密度。由于鈣流檢測需要讀取光信號，細胞需要均勻鋪滿孔底，避免密度過高導致信號干擾。當然，根據細胞類型和實驗需求，這一密度也可以根據細胞密度適當調整。

如果您對于新藥研發臨床前研究過程中有一些困惑或者想要深入了解的專題內容，可以留下您的問題和建議，美迪西希望和您一起，探索新藥研發的奇妙世界。