美迪西藥理學(xué)服務(wù)為您提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等試驗(yàn)，詳情可聯(lián)系獲得。郵箱：marketing@medicilon.com.cn 電話：021 58591500。

裸鼠服務(wù)流程

    1、操作方案設(shè)計
2、方法開發(fā)
3、細(xì)胞制備
4、裸鼠成瘤

裸鼠皮下成瘤動物實(shí)驗(yàn)方法 

分組:SW620細(xì)胞組、SW620轉(zhuǎn)染無關(guān)siRNA組、SW620轉(zhuǎn)染目的基因（每組6只）。 
細(xì)胞準(zhǔn)備及注射裸鼠方法： 到動物室準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)。 

取出未作處理的小鼠和處理后小鼠用鼠籠，順序擺放在超凈臺中。選體形較大的小鼠稱重，以3μl/g劑量，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠。約5分鐘，小鼠開始進(jìn)入安靜狀態(tài)，將其仰臥固定。切忌麻醉劑過量使用。 

(1)鋪白布于鼠板上，仰臥位固定小鼠四爪，碘伏棉球消毒腹側(cè)面上至頸部、下至腹股溝、后至腋后線。消毒兩次。鋪手術(shù)巾于小鼠上，在其左側(cè)剪口（4*4cm），暴露其左側(cè)腹部, 用碘伏消毒一次。在左側(cè)肋弓下緣1cm處向下剪開2cm皮膚，暴露腹壁肌肉，鑷子牽拉腹壁肌肉，避開腹腔內(nèi)脾臟，剪開腹壁肌肉，暴露內(nèi)臟。用棉簽蘸PBS，撥出脾臟下極，切忌牽拉，以免損傷脾臟和胰腺。 
(2)找到脾臟同時，用25微升Matrigel混合于細(xì)胞管中，打懸細(xì)胞沉淀，使細(xì)胞分散均勻成單細(xì)胞懸液。用BD針吸凈EP管中的單細(xì)胞懸液，稍退針芯，打出氣泡，在脾臟下極內(nèi)側(cè)（凹面）進(jìn)針向脾門方向約2mm開始注射細(xì)胞，注射完畢停留約30秒鐘，緩慢退出針，以防細(xì)胞滲出。同時用蘸PBS的棉球壓迫周圍出血點(diǎn)止血。 
(3)用注射器吸取慶大霉素注射液（用生理鹽水250：1稀釋）約400微升，注入腹腔，棉球蘸干皮緣滲出的抗生素。開始縫合腹壁肌肉（連續(xù)縫合4針）。再次用注射器吸取慶大霉素注射液約400微升沖洗縫合口，棉球蘸干。縫合皮膚（間斷縫合4針）。碘伏棉球消毒縫合口。撤除固定，使小鼠處于自然體位，放于鼠籠中。 
(4)所有細(xì)胞注射完畢，剪耳標(biāo)記，記錄剪耳標(biāo)記及分組情況。 
Day5-7：注意小鼠的狀態(tài)，及時發(fā)現(xiàn)小鼠是否有因手術(shù)刺激、胰腺損傷、感染等死亡的情況。 
Day42：頸椎離斷，處死小鼠，解剖尸體，觀察脾臟腫瘤生長狀況，肝臟、肺臟及其他器官是否有轉(zhuǎn)移瘤形成。所有可疑組織均做好標(biāo)記，拍照，若有表面結(jié)節(jié)，計數(shù)后，凍于液氮中。視結(jié)果情況用10%甲醛溶液固定過夜后做病理。 

裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)技巧

1、細(xì)胞狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長狀態(tài)一定要好，取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜;收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
2、胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細(xì)胞中的血清。
3、用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個細(xì)胞/支，接種體積為0.1ml，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個細(xì)胞/ml。
4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內(nèi)完成，途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝。
5、選擇的裸鼠一般在5-8周齡，體重18-20g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部、腹股溝中上部。
6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率。
7、接種時，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。
8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。

9、接種后一周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。
10、根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大，一般不要超過1000mm3 ，腫瘤負(fù)荷過大常常會以違背動物倫理而被雜志社刁難(因?yàn)檫@個問題悲慘地被plos one拒過稿）。
11、腫瘤大小測量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸，b為短軸)。
12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。

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