當(dāng)生物仿制藥產(chǎn)品在美國(guó)仍然必須得到批準(zhǔn)、在歐洲有且只有三個(gè)產(chǎn)品 上市的情況下，其在印度和中國(guó)的發(fā)展正突 飛猛進(jìn)、大步向前。在印度，醫(yī)藥行業(yè)由仿 制藥公司占主導(dǎo)地位并推動(dòng)發(fā)展，這些公司 利用重新設(shè)計(jì)化學(xué)生產(chǎn)工藝的技能，建立了繁 榮發(fā)展的業(yè)務(wù)。按照這種說(shuō)法，生物仿制藥領(lǐng) 域也取得新的重要發(fā)展，這可能令人感到毫無(wú) 意外。正如小分子仿制藥，該國(guó)極有潛力成為 世界上生物仿制藥產(chǎn)品的主導(dǎo)國(guó)家。

在印度，已經(jīng)有20多家公司積極地活 躍于生物仿制藥領(lǐng)域。事實(shí)上，根據(jù)全球行 業(yè)分析家報(bào)道，該國(guó)的生物仿制藥市場(chǎng)幾乎 將要翻三番，從2011年的4.84億美金增長(zhǎng)到 2016年的14億美金。很多生物仿制藥產(chǎn)品已 經(jīng)用于病人，這些藥品包括:已經(jīng)以生物仿制 藥形式在歐洲上市的促紅細(xì)胞生成素，到仍 有待獲得歐盟監(jiān)管部門批準(zhǔn)的、包括例如利 妥昔在內(nèi)的單細(xì)胞克隆抗體。

去年，印度政府出臺(tái)了生物仿制藥管理 指南。該管理指南在行業(yè)和學(xué)術(shù)部門的協(xié)同 合作下，由中央藥品標(biāo)準(zhǔn)控制機(jī)構(gòu)和生物技 術(shù)部制定，建立從一個(gè)生物活性類似物到市 場(chǎng)化的生物仿制藥的正式監(jiān)管途徑。并且， 它制定了其生產(chǎn)過(guò)程和質(zhì)量控制的規(guī)格要求 以及上市前必需的注冊(cè)工作，包括臨床前和 臨床研究，質(zhì)量可比較性研究以及上市后的 監(jiān)管要求。

一個(gè)生物仿制藥若需在印度批準(zhǔn)上市， 在該國(guó)市場(chǎng)上必須有已經(jīng)授權(quán)上市的產(chǎn)品進(jìn) 行比較，包括完整數(shù)據(jù)包，或者已經(jīng)批準(zhǔn)并 在該國(guó)銷售至少4年。在出現(xiàn)全國(guó)性的醫(yī)療 緊急事件時(shí)或者對(duì)于適應(yīng)癥沒有其它的治療 方法時(shí)，這個(gè)4年期限的規(guī)定可以免除或縮 短。該指導(dǎo)意見書適用于國(guó)內(nèi)研發(fā)和進(jìn)口到 印度的生物仿制藥。

同時(shí)，盡管中國(guó)即將面世的管理指南 在過(guò)去幾個(gè)月得到業(yè)內(nèi)的高度贊揚(yáng)，但截止 到2013年6月，該國(guó)的食品藥品監(jiān)督管理局 （SFDA）仍沒有下發(fā)正式的生物仿制藥管理 指南。中國(guó)藥監(jiān)局在指導(dǎo)意見書上一直和美 國(guó)FDA協(xié)同合作，其內(nèi)容將會(huì)非常類似于美 國(guó)去年公布的版本。當(dāng)前，雖然這類指南觸 手可及，但2007年下發(fā)的生物藥品規(guī)定，仍 然沒有將生物仿制藥進(jìn)行明確的產(chǎn)品歸類。 實(shí)際上，它們的確需要進(jìn)行臨床三期試驗(yàn)。

盡管正式的管理指南并未出臺(tái)，生物仿 制藥品在中國(guó)已經(jīng)出現(xiàn)了近1/4世紀(jì)。早在 1989年乙型干擾素產(chǎn)品即登陸中國(guó)市場(chǎng)，現(xiàn) 在包括單克隆抗體在內(nèi)的多達(dá)350種生物仿 制藥產(chǎn)品在市場(chǎng)上進(jìn)行銷售。根據(jù)Deloitte 報(bào)道，生物仿制藥市場(chǎng)極度看好。當(dāng)前，雖 然生物仿制藥產(chǎn)品占有10%的中國(guó)藥品市 場(chǎng)，但其年增長(zhǎng)率仍接近1/3。來(lái)自于Kantar Health的數(shù)據(jù)顯示，2013年37億美金的藥品 市場(chǎng)銷售額中，單克隆抗體到2015年將占有 大約1/3的生物仿制藥銷售，屆時(shí)常用的生物 仿制藥相較于原研產(chǎn)品將出現(xiàn)60%的折扣。 相比之下，歐洲常用生物仿制藥品僅僅便宜 大約20%。

歐洲生物仿制藥之路

隨著印度公司開始執(zhí)行政府新出臺(tái)的 管理指南、中國(guó)公司正在等待，思考?xì)W盟區(qū) 域的管理指南落實(shí)情況將不無(wú)裨益。第一個(gè) 在歐洲上市的生物仿制藥是基因重組人生長(zhǎng) 素，來(lái)自Sandoz公司，其原研藥品是Pfizer 公司2006年上市的生長(zhǎng)激素藥品Genotropin (somatropin)，現(xiàn)在其它幾家公司也上市了生 長(zhǎng)激素的生物仿制藥品。另有兩個(gè)生物藥品也以仿制藥形式在歐洲上市，并有多家供應(yīng)商：治療貧血 的紅細(xì)胞生成素（仿制來(lái)自于安進(jìn)公司的Epogen產(chǎn)品和楊 森公司的Procrit產(chǎn)品）和治療嗜中性白血球減少癥的重組人 白細(xì)胞生成素（仿制來(lái)自安進(jìn)公司的Neupogen產(chǎn)品）。

在第一個(gè)生物仿制藥品于2004批準(zhǔn)前，歐盟管理指南 就已經(jīng)執(zhí)行了數(shù)年。有趣的是，在做出一個(gè)藥品是否符合 生物仿制藥的要求在于其分析程序和生產(chǎn)過(guò)程的決定后， 歐盟迄今在臨床實(shí)踐和監(jiān)管過(guò)程上，都沒有正式的生物仿 制藥定義。該管理指南要求必須進(jìn)行比較性研究，因?yàn)樗? 可以證明生物仿制藥和參照品在質(zhì)量、安全和有效性上是 幾乎相同的。

然而，歐盟迄今仍沒有批準(zhǔn)單克隆抗體的生物仿制藥 上市。那些已經(jīng)上市的生物仿制藥是天然生長(zhǎng)激素和細(xì)胞 因子的市場(chǎng)化產(chǎn)品。一套完整的單克隆抗體管理指南草案 在2011年下發(fā)，Sandoz在當(dāng)年六月宣布該公司將開展依 拉西普（商品名Enbrel）生物仿制藥三期臨床試驗(yàn)，該藥 物是Pfizer公司治療自體免疫失調(diào)的單克隆抗體藥物。

對(duì)于獲批的生物仿制藥產(chǎn)品，EMA要求的臨床試驗(yàn)不 盡相同。這些產(chǎn)品實(shí)際上是幾乎相同但非完全相同。糖基 化代謝模式可能不同，例如，眾多的雜質(zhì)圖譜。但是，從 根本上來(lái)說(shuō)，這些產(chǎn)品和原研藥有著相同的生物效應(yīng)，并 證明了其安全性和令人信服的質(zhì)量。

生物仿制藥市場(chǎng)潛力巨大

此外，更近的美國(guó)管理指南大綱提出了很多重要的 不同之處。相較于歐洲的現(xiàn)狀，美國(guó)管理指南給出了生物 仿制藥的定義，并規(guī)定其必須和參照藥物高度相似，在安 全性、純度或效能方面，在臨床上沒有明確的差異。這份 最新的指南要求生物仿制藥必須和原研藥物擁有同樣的療 效、審批途徑以及作用機(jī)理。

回到歐洲來(lái)說(shuō)，為了證明生物相似性，制藥公司必 須在理化特點(diǎn)和功能性上進(jìn)行廣泛而給力的比較性研究。 從某種意義上來(lái)說(shuō)，因?yàn)樯a(chǎn)原研藥的過(guò)程是非公開的信 息，在開始階段制藥公司往往在黑暗中摸索前行。原研藥 物和任何生物仿制藥間不可避免存在差異，因?yàn)榘l(fā)酵過(guò)程 中一丁點(diǎn)的小變化都可能導(dǎo)致生物效應(yīng)的不同。這也是為 什么必須進(jìn)行一套全面的比較性研究。

不同的生物過(guò)程導(dǎo)致雜質(zhì)圖譜的差異。因此，與產(chǎn)品 和生產(chǎn)過(guò)程相關(guān)的任何雜質(zhì)必須進(jìn)行識(shí)別、定性和定量， 然后與原研藥進(jìn)行比較。任何其它加入到制劑中的物質(zhì)必 須以這種方式進(jìn)行評(píng)估，確保該生物仿制藥和參照制劑， 在其安全性、純度或效能上沒有負(fù)面的影響。必須對(duì)任何 差異進(jìn)行描述并對(duì)其造成的影響經(jīng)討論后置于上市授權(quán)批 準(zhǔn)文件中。

化學(xué)相似性評(píng)估

當(dāng)確定生物仿制藥和其參照藥品是否高度相似時(shí)， 必須考慮很多的因素。首要考慮的是其表達(dá)系統(tǒng)。這包括 正轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株、轉(zhuǎn)基因系列、任何啟動(dòng)子的性質(zhì)和其 它控制區(qū)的確認(rèn)、系統(tǒng)的基因同一性和穩(wěn)定性、主細(xì)胞庫(kù) 和有限的處于體外細(xì)胞階段的細(xì)胞?；蚩截悢?shù)也非常重 要，正如基因測(cè)序過(guò)程以及其是否參與mRNA或cDNA。 同樣，也要求進(jìn)行熒光原位雜交（FISH）和限制酶分析。

第二，必須考慮其生產(chǎn)過(guò)程。除了產(chǎn)品表達(dá)水平和內(nèi) 源性逆轉(zhuǎn)錄粒子的表達(dá)外，細(xì)胞株、糖基化結(jié)構(gòu)和引入的 異質(zhì)性應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。并且，細(xì)胞的生存能力和產(chǎn)率，產(chǎn)品 的完整性、降解產(chǎn)物以及宿主細(xì)胞蛋白和DNA的水平也必 須進(jìn)行研究和測(cè)試。

對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品的性質(zhì)產(chǎn)生巨大影響的另一因素是生產(chǎn)中 所使用的培養(yǎng)基。是否含有血清？是否存在蛋白質(zhì)？化學(xué) 成分是否確定？甚至，生物反應(yīng)器的形式以及下游生產(chǎn)過(guò) 程都對(duì)產(chǎn)品有較大的影響。與生產(chǎn)過(guò)程和產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì) 是如何除去的？該產(chǎn)品是如何制備的，其穩(wěn)定性如何？生 產(chǎn)商在確定化學(xué)相似性前，這些問(wèn)題都必須予以回復(fù)。

第三個(gè)重要的考慮因素是微生物和病毒污染物對(duì)產(chǎn)品 整體安全性的影響。在一些重要的用于生物反應(yīng)過(guò)程的起 始原料上，很難做到避免病毒污染，因?yàn)樗鼈兺莿?dòng)物 源的衍生產(chǎn)品。除了微生物、真菌和支原體污染物外，它 們也能夠通過(guò)環(huán)境或操作人員，以外在的形式進(jìn)入生產(chǎn)過(guò) 程中。因此，落實(shí)高效的檢測(cè)體系并設(shè)計(jì)如過(guò)濾、滅活以 及色譜分離等除去這些污染物的過(guò)程，是非常關(guān)鍵的。

證明可比性的研究

進(jìn)行可比性研究是提供生物相似性和產(chǎn)品安全性的重要 一環(huán)。該過(guò)程包括用以建立雜質(zhì)圖譜和生物同一性的化學(xué)分 析測(cè)試以及展示產(chǎn)品療效和安全性的臨床前和臨床研究。

首先，必須進(jìn)行化學(xué)分析流程。對(duì)于小分子仿制藥， 這相對(duì)簡(jiǎn)單明了，只要簡(jiǎn)單證明該分子的化學(xué)特性是相同 的，比如晶體結(jié)構(gòu)；對(duì)于生物仿制藥，這就要更為復(fù)雜 了，除了證明結(jié)構(gòu)完全一致，研究還必須證明生物仿制藥 的結(jié)構(gòu)和參照藥物足夠相近以至在生物活性上沒有功能性 差異。

通常，通過(guò)質(zhì)譜來(lái)進(jìn)行測(cè)量分子量，較常使用的有基 質(zhì)輔助激光解析質(zhì)譜，電噴射或者LC技術(shù)；通過(guò)包括十二 烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、HPLC 多肽圖譜、氨基酸測(cè)定在內(nèi)的方法來(lái)研 究雜質(zhì)和異構(gòu)體以及結(jié)合碳水化合物含 量分析來(lái)評(píng)估糖基化結(jié)構(gòu)。盡管通過(guò)這 些研究收集的信息可能相對(duì)有限，仍可 能采用圓二色譜評(píng)估多肽的高序結(jié)構(gòu)。

雖然，更多關(guān)于高序蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 的信息可以從生物相關(guān)的測(cè)試中得以確 定，但該過(guò)程仍需要檢測(cè)該產(chǎn)品的生物 活性。這些檢測(cè)結(jié)果必須與參照藥物 進(jìn)行比較。盡管監(jiān)管機(jī)構(gòu)并沒要求參照藥物和仿制藥的 質(zhì)量特性必須相同，但兩活性藥物間的任何細(xì)微的結(jié)構(gòu) 差異或轉(zhuǎn)譯后修飾的變化都需要進(jìn)行解釋說(shuō)明，比如糖 基化結(jié)構(gòu)。

下一個(gè)在檢測(cè)清單上，也是歐盟管理指南上重點(diǎn)突出 的——是需要證明生物仿制藥在相應(yīng)的生物體系內(nèi)，其效 能和參照藥品具有可比性。測(cè)量生物活性的效價(jià)測(cè)定，作為 穩(wěn)定性研究項(xiàng)目的部分，必須進(jìn)行研究，并進(jìn)行批簽發(fā)。該 測(cè)定可以是細(xì)胞水平的體外測(cè)試，體內(nèi)研究或者酶測(cè)定。細(xì) 胞水平測(cè)定包括配體結(jié)合測(cè)定、細(xì)胞增殖、細(xì)胞死亡和細(xì)胞 毒性研究，測(cè)量激活或抑制信號(hào)比如cAMP，評(píng)估細(xì)胞病變 效應(yīng)以及報(bào)告基因測(cè)試。很可能的是，根據(jù)產(chǎn)品的作用機(jī)理 或復(fù)雜程度，需要進(jìn)行不止一項(xiàng)的生物檢測(cè)。

細(xì)胞水平的效能測(cè)定通過(guò)動(dòng)物研究具備諸多優(yōu)勢(shì)，過(guò) 程快、節(jié)省成本并減少動(dòng)物的使用數(shù)量。它們執(zhí)行起來(lái)簡(jiǎn) 單，比使用活體動(dòng)物監(jiān)管要求少，使生物藥品在其研發(fā)早 期階段顯現(xiàn)并證明和參照藥品具有相同的生物效應(yīng)。 在大多數(shù)情況下，效能測(cè)定通過(guò)一系列的不同濃度樣 品評(píng)估該仿制藥品的生物活性，并在同樣的條件下與參照 藥品的效果進(jìn)行比較。表1（雙劑量反應(yīng)曲線）根據(jù)該藥 品屬于激動(dòng)劑或拮抗劑，激活劑或者阻滯劑，顯示了其促 進(jìn)或抑制的生物反應(yīng)。

● 效能價(jià)測(cè)定通常在一系列的濃度樣品下測(cè)量該藥品 的生物活性

● 測(cè)試樣品效價(jià)時(shí)，包括一個(gè)特征明顯的參照標(biāo)準(zhǔn)對(duì) 比尤為重要

● 產(chǎn)生的劑量反應(yīng)曲線可以描述刺激或抑制的生物 反應(yīng)

● 效能通常展示了EC50（半數(shù)有效劑量）或IC50 （半數(shù)抑制濃度）劑量值，該劑量值誘導(dǎo)一半的最大響應(yīng)。

這些在穩(wěn)定性和生物活性上的測(cè)試，必須足夠敏感可 以顯示出微小的差異。用于測(cè)定的理想細(xì)胞株應(yīng)來(lái)自與生 理相關(guān)的來(lái)源，若有必要，它們也可以基因工程產(chǎn)品。不 論哪種細(xì)胞源，對(duì)于應(yīng)用于日常質(zhì)量控制工作的測(cè)定，它 們必須特征明顯的、在測(cè)試中能夠以預(yù)設(shè)方式響應(yīng)。驗(yàn)證也非常重要，特別是如果測(cè)試的產(chǎn)品將用于后階段和商 業(yè)化。在這種情況下，依照ICH Q2（R1）規(guī)定，必須進(jìn) 行完全驗(yàn)證。盡管該過(guò)程很費(fèi)時(shí)間，但對(duì)于認(rèn)證產(chǎn)品卻 有必要。

盡管大部分的測(cè)試需在體內(nèi)進(jìn)行，但為了注冊(cè)文件要 求，需要進(jìn)行一些動(dòng)物研究，應(yīng)該對(duì)這些研究予以設(shè)計(jì)， 最大化它們能夠提供的信息，這樣就會(huì)需要盡可能少的動(dòng) 物。該測(cè)試將評(píng)估與藥物臨床使用相關(guān)的藥效和活性，包 括至少一項(xiàng)重復(fù)劑量毒性研究。進(jìn)行中的藥代動(dòng)力學(xué)研究 包括抗體滴度、交叉反應(yīng)和中和能力。與全新的生物藥相 比，生物仿制藥的安全藥理、生殖毒性、致突變性以及致 癌性研究不是必需的。

最后，生物仿制藥和參照生物藥品的可比性必須通過(guò) 人體試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行評(píng)估。第一階段的安全性試驗(yàn)必須完成； 通常是在一群健康的志愿者中進(jìn)行；第三階段的患者試 驗(yàn)，必須將生物仿制藥的相對(duì)療效和參照生物藥品進(jìn)行比 較。藥代動(dòng)力學(xué)、藥效以及臨床效果應(yīng)在該階段進(jìn)行全部 評(píng)估。

甚者，一旦生物仿制藥批準(zhǔn)上市，就應(yīng)當(dāng)建立藥物警 戒計(jì)劃。突出的問(wèn)題比如免疫原性，患者如果對(duì)該產(chǎn)品產(chǎn) 生了意外的免疫反應(yīng)，雖然很罕見，但還是會(huì)發(fā)生。

生物仿制藥未來(lái)

隨著歐洲生物仿制藥市場(chǎng)擴(kuò)張至單克隆抗體領(lǐng)域、美 國(guó)市場(chǎng)的第一個(gè)生物仿制藥即將面市，亞洲的生物仿制藥 生產(chǎn)商不光坐擁本土繁榮發(fā)展的潛力市場(chǎng)，在西方國(guó)家也 將收獲不斷增長(zhǎng)的銷售機(jī)遇。

為了充分利用好這些新興的市場(chǎng)機(jī)遇，生產(chǎn)商們除了 需要滿足本土監(jiān)管部門正式下發(fā)的要求外，還必須符合所 有目標(biāo)市場(chǎng)監(jiān)管部門要求的質(zhì)量和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。有且僅有那 些能夠滿足全世界各國(guó)際和地區(qū)監(jiān)管部門質(zhì)量和安全要求 的公司，其生產(chǎn)的生物仿制藥擁有巨大的潛力市場(chǎng)