隨著雙抗技術的發展，雙抗如今呈現出良好的發展前景，各大公司在布局雙抗產品研發的同時，也需關注在雙抗的檢測和分析中有許多需要針對這種技術而加以注意和考量的要點。美迪西生物技術藥物分析部主任章登吉博士在云講堂中為我們帶來了三位一體的雙抗生物分析講座，請點擊文末的“閱讀原文”，即可進入視頻回放鏈接，觀看章博士的精彩講解！

美迪西生物技術藥物分析部靈活運用ELISA, ECL, TRFIA, CLIA, IF, IP, CoIP, qPCR, FACS, ELISpot, 酶學等多種方法，支持前沿生物藥如蛋白、抗體（單抗、雙或多特異性抗體、抗體片段）、ADC、多肽、核酸、疫苗及細胞基因治療等藥物在早期開發、臨床前和臨床階段的PK/TK/Immunogenicity(Total ADA& Nab)/Biomarker&Cytokine等研究評價。目前已經支持了多個涉及Her2, Trop2, Muc1等靶點的ADC藥物，和EGFR,PCSK9, IL-17A, IL-6, IL-23, VEGF, CD47, TNF-α, CD20，TIGIT等熱門靶點及4-1BB, PD1, PDL-1, CTLA4等免疫檢查點的單抗或多抗藥物，針對CD19類的CAR-T，還有各類融合蛋白、核酸以及眾多涉及糖尿病、心血管、骨、腫瘤等相關疾病的多肽類藥物不同階段的研究工作。

理論：1+1＞2的雙特異性抗體

單克隆抗體主要通過結合單一的特異表位，起到一定的生物學作用，比如阻斷蛋白相關作用、激活或調節受體功能。抗體的Fc片段還能起到誘導抗體依賴細胞介導的細胞毒作用或補體依賴的細胞毒作用。但是也限制了其在一些領域的應用，例如需要阻斷多種信號通路的腫瘤、自身免疫疾病的治療，以及由于病毒高突變率需要結合多抗原位點阻止病毒逃逸的感染類疾病的治療。因此，雙特異性抗體也就應運而生。

雙特異性抗體（BsAb）是指能同時特異性結合兩種抗原或兩個表位的抗體分子，可以發揮兩種單抗聯合的協同作用。雙特異性抗體在自然狀態下并不存在，需要通過重組DNA或細胞融合技術人工制備實現。

雙特異性抗體相比單抗的優勢主要在于可介導時序或空間效應，具體來說就是，雙靶點雙抗或單靶點雙表位雙抗的有效性可能優于兩個單靶點單抗的聯合使用；雙靶點融合的一個抗體藥物分子的副作用可能小于單靶點的抗體藥；雙靶點融合的一個抗體藥物分子可能解決聯合用藥不能解決的起效機制問題。但同時，技術門檻和研發成本較高，構建階段可能會遇到表達量低、穩定性差的問題，開發評價階段可能會遇到模型建立的問題，因此整個開發過程需要綜合考慮靶點生物學、結構生物學、抗體工程、篩選策略等。

全球領先的雙抗藥物研發企業主要有Amgen、羅氏、MacroGenics、Xencor、Genmab、阿斯利康，國內的企業則主要有康寧杰瑞、百濟神州、岸邁生物、信達生物等，他們在項目數量和開發進度上處于第一梯隊。

雙特異性抗體的主要作用機制主要有如下形式：

政策：讀懂政策不迷路

FDA針對雙特異性抗體而出臺的指南并不多，只有2019年四月出臺的 Bispecific Antibody Development Programs, draft Guidance。

其他可以參考的內容涉及雙特異性抗體的指南包括，美國FDA的Guidance for Industry – Bioanalytical Method Validation, ICH出臺的ICH Guideline – Bioanalytical Method Validation M10, 2019年FDA出臺的Immunogenicity Testing of Therapeutic Protein Products – Developing and Validating Assays for Anti-Drug Antibody Detections和2018年EMA出臺的Guideline on Immunogenicity assessment of therapeutic proteins。

國內的法規和指南有涉及到雙特異性抗體的包括，9012生物樣品定量分析方法驗證指導原則，《治療性蛋白藥物臨床藥代動力學研究技術指導原則（征求意見稿）》和《藥物免疫原性研究技術指導原則（征求意見稿）》。

實踐：方法建立需要考慮的因素

生物藥物的分析方法是需要根據不同研究內容針對性的設計的，雙特異性抗體也不例外。根據分子不同的組成、性質、作用機制以及需要監測分析的內容，我們在實踐中也應該設計和選用獨有的特異的方法來得到可靠優質的數據。在設計和選擇雙抗的分析方法時，我們需要從以下幾個角度去著重考慮：

在結構上，根據合成的雙抗是否含有Fc段蛋白，可以分為IgG-like雙特異性抗體（含有Fc部分）和非IgG-like雙特異性抗體（不含Fc部分）。IgG-like雙特異性抗體具有FC介導的效應功能，分子量相對較大，有助于抗體后期的純化并提高其溶解性、穩定性，對Assay的靈敏度要求不高，早期可基于IgG Fc抗體來建立方法；非IgG-like雙特異性抗體缺乏Fc段，僅通過抗原結合力發揮治療作用，具有較低的免疫原性、易于生產、分子量小等特點。因相對分子量較小，其在腫瘤組織的滲透性較高，因此具有更強的治療效果。在選擇生物分析方法時對Assay的靈敏度要求高，通常檢測抗體的方法基本不可用。

雙特異性抗體是一種具有多結構域的抗體蛋白，有多個不同的結合位點，作用機制更為復雜，這些為雙抗藥物的分析方法的設計增加了更多的考慮點，帶來了更多的復雜性，需要測量的分子形式包括total, free, total bound，Partial bound，這些形式的分析需要Case by Case的考慮。

這種多結構域的特征也使其免疫原性潛在考慮可能更為復雜，對一個域的免疫應答可以抑制特定功能，但又同時保持其他域完整；潛在新表位的產生也可能引起顯著的免疫原性。因此，考察對雙特異性抗體的免疫應答可能需要開發多種測定來測量對雙特異性抗體的不同結構域的免疫應答，免疫原性分析方法的考慮需要更為復雜和全面。

解決方案：美迪西生物技術藥物分析部

美迪西生物技術藥物分析室致力于為客戶量身打造case by case的生物分析方法，并利用先進儀器和技術完成優質高效的試驗服務。