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蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。
表達系統 | 優點 | 缺點 | 應用領域 |
大腸桿菌表達系統 (Escherichia coli) | 表達水平高; 低成本; 簡單的培養條件; 生產迅速; 可拓展性強; 轉化操作簡單; 蛋白表達可以通過多個參數進行優化; 容易形成二硫鍵 | 蛋白折疊性較差(包括細菌蛋白); 易形成包涵體; 低效的體外折疊可能抵消優勢; 與真核生物不同密碼子體系; 很少的翻譯后修飾; 內毒素 | 純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現); 藥物蛋白生產 |
畢赤酵母表達系統 (Pichia pastoris) | 表達水平高; 低成本; 簡單的培養條件; 生產迅速; 可拓展性強; 分泌蛋白或細胞內表達的良好選擇; 蛋白分泌高效且允許簡單純化; 廣泛的翻譯后修飾; N-端糖基化能力優于釀酒酵母; 無內毒素 | 使用甲醇作為誘導劑具有一定危害; 糖基化仍然不同于哺乳動物細胞 | 純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現) |
釀酒酵母表達系統 (Saccharaomyces cerevisiae) | 表達水平較高; 分泌蛋白或細胞表達的良好選擇; 低成本; 簡單的培養條件; 可拓展性強; 擁有大多數真核生物的翻譯后修飾; 有效的蛋白折疊; 無內毒素; | 比畢赤酵母的表達水平低; 分泌能力可能低于畢赤酵母; 糖基化與哺乳動物細胞不同; 過糖基化; N-端糖基鏈結構具有致敏性 | 純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現); 藥物蛋白生產 |
哺乳動物細胞表達系統 | 較高的表達水平; 中度的可擴展性; 細胞的懸浮培養特性可大規模生產; 有效的蛋白折疊; 適合分泌蛋白; 充分的翻譯后修飾; 無內毒素 | 培養基昂貴; 復雜的生長條件 | 純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現); 藥物蛋白生產; 基于細胞的研究 |
桿狀病毒浸染后的昆蟲細胞 ( 桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統) | 表達水平高(特別是細胞內蛋白); 較快的生長速度; 有效的細胞折疊; 中度可擴展性; 廣泛的翻譯后修飾; 糖基化與哺乳動物細胞類似; 相對容易地酶促的去糖基化(對于蛋白結構測定有利); 無內毒素 | 培養基昂貴; 需要大量的病毒; 親肽的分泌通路低效; 糖基化仍然不同于哺乳動物細胞; 病毒侵染會導致細胞裂解和潛在的表達蛋白降解 | 純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現) |
瞬時表達系統 | 蛋白的快速生產通道 | 轉染試劑昂貴; 需要大量質粒DNA | |
穩定細胞系 | 可獲得蛋白生產細胞株系 | 生產速度緩慢(需要數月),特別是使用選擇性克隆的情況下傳代過程中表達能力可能下降 | |
無細胞蛋白生產 | 蛋白的快速生產通道; 大腸桿菌,小麥胚芽,昆蟲和哺乳動物系統均市售; 生產量的可控; 蛋白合成條件可控; 可容易地吸收非氨基酸組分; 可利用PCR產物作為模版,適合于簡單的高通量方法; 在沒有犬科胰島素的情況下有限的翻譯后修飾 | 量化生產成本昂貴 | 純化蛋白的生產(結構、酶、藥物發現); 體外表達克隆; 同位素標記過的核磁共振蛋白; 吸收非天然氨基酸組分 |
BacMam-介導的瞬時轉導 | 蛋白的快速生產通道; 可擴展性強; 無需純化所需的大量質粒DNA; 非裂解(參見桿狀病毒/昆蟲細胞) | 許多人體細胞的高效轉導; 病毒需求量大 |