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步驟 | 實驗內(nèi)容 | 實驗時間 | 備注 |
---|---|---|---|
1 | 重組質(zhì)粒構(gòu)建 | 2 周 | 可選擇不同載體,不同標簽His, Trx , GST, SUMO… |
2 | 重組表達測試 | 1周 | 不同表達菌株可選 |
3 | 可溶性表達測試 | 1-2周 | 不同誘導劑,誘導溫度,也可重新考慮基于蛋白質(zhì) 結(jié)構(gòu)點突變或者缺失突變的突變體構(gòu)建 |
4 | 小規(guī)模蛋白表達和純化 | 1-2周 | 若為包涵體表達,時間和方法將有所調(diào)整 |
5 | 大規(guī)模蛋白表達和純化 | 根據(jù)表達體積商定 | 可選擇搖瓶或者發(fā)酵罐培養(yǎng) |
您可根據(jù)實驗需求選擇上述任一實驗內(nèi)容,或相關(guān)實驗內(nèi)容的組合;
純化時選用親和純化、離子柱純化、疏水填料純化和分子篩純化; 蛋白本身特性,表達系統(tǒng)的選擇會影響最終蛋白的純度和活性。