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藥物發現
Drug discovery
藥物發現

大環肽篩選（mRNA展示技術）

mRNA展示技術是將基因型(mRNA)與表型(多肽/蛋白)融合的體外多肽/蛋白篩選技術，將肽與其編碼mRNA進行共價連接，使用嘌呤霉素作為連接物。美迪西應用此技術構建規模超過1013的mRNA展示庫，通過無細胞PURE體外翻譯系統將非天然氨基酸整合到多肽中，經過對靶標蛋白的親和純化后對與多肽連接的cDNA進行測序，可精準篩選到與靶標相互作用的多肽。

mRNA展示庫的構建
  • DNA庫制備：使用分子生物學技術制備DNA庫(通常為編碼約4~14個氨基酸的環肽) DNA庫的體外轉錄：通過RNA聚合酶的作用，DNA庫被轉錄成mRNA 嘌呤霉素連接：嘌呤霉素分子通過DNA連接子序列連接到每個mRNA上，嘌呤霉素是一種抗生素，作為氨基酰化的tRNA類似物(tRNA在翻譯過程中向核糖體傳遞氨基酸)，并作為mRNA和肽之間的連接子 mRNA庫的體外翻譯：mRNA-嘌呤霉素偶聯物進行體外翻譯，由核糖體翻譯生成相應的肽 線性肽的環化修飾：通過化學合成技術進行環化修飾 逆轉錄：mRNA逆轉錄形成mRNA-cDNA雙鏈，產生mRNA/cDNA-嘌呤霉素-肽偶聯物庫
    整個過程均在體外進行，無需依靠細胞。
體外篩選
  • 孵育與洗滌：將mRNA-cDNA-肽融合庫與固定在固體載體上的靶蛋白一起孵育，然后進行洗滌以去除未結合的肽 擴增、富集與測序：結合肽的cDNA通過PCR擴增，然后用作DNA庫模板，在進一步的重復幾輪mRNA展示庫篩選中，富集與靶蛋白高親和力的結合肽，最后通過cDNA的測序來確定多肽的結構
    環肽篩選平臺.png

    Nat Rev Chem. 2020, 4(2): 90-101. doi: 10.1038/s41570-019-0159-2.Trends Pharmacol Sci. 2021, 42(5): 385-397. doi: 10.1016/j.tips.2021.02.004.

    除了多肽藥物體外篩選，美迪西還可以提供多肽藥物的合成服務。美迪西多肽合成研究團隊長期致力于解決限制多肽藥物發展和應用的核心問題，目前已建立了從上游非天然氨基酸結構單元的合成、多肽藥物修飾和大規模合成，到下游多肽藥物信號轉導通路和作用機制研究的完善體系。
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